VERO细胞培养、纯化灭活的狂犬病毒

  细胞培养知识

VERO细胞培养、纯化灭活的狂犬病毒

vero细胞
  Vero细胞被成功的用来培养狂犬病疫苗、乙脑疫苗等多种疫苗,在非典期间又为研究冠状病毒做出贡献,在医药研究种广泛应用。
来源: 非洲绿猴肾细胞 形态:上皮细胞 生长特性:贴壁
注释:该细胞是日本千叶大学的Y. Yasumura和Y. Kawakita于1962年3月27日从一只正常的成年非洲绿猴肾组织培养出来的。
培养液:MEM( 含 2 mM L-谷氨酰胺 和 Earle's BSS,1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸钠), 10%胎牛血清
传代:吸去培养液。 用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次,以去除血清(血清会抑制胰酶的活性)。 加2-3毫升Trypsin-EDTA,放在37℃培养箱内约5分钟,直到细胞全部脱落。 加6-8毫升培养液,用移液器把细胞吹散。 加适量的细胞到新的培养器皿中。(以1:3**1:6为宜,传代期间培养液每周更换2-3次)
冻存: 95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。
CHO-K1细胞
 
 
 
 
 CHO-K1细胞是实验中非常常用的一个细胞株,在生物制药中使用也非常广泛。该细胞株培养条件简单,贴壁强度适中,比较容易转染,很适合用它来研究一般哺乳动物基因的功能。
来源:Cricetulus griseus (中国仓鼠) 卵巢 形态:表皮细胞 生长特性:贴壁
注释:CHO-K1由CHO衍生而来,CHO是T. T. Puck 在1957年从一只成年中国仓鼠卵巢获得的(1)。
培养液:Ham's F12K (含2 mM L-谷氨酰胺,1.5 g/L NaHCO3), 10% 胎牛血清。
传代:吸去培养液。 用0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次,以去除血清(血清会抑制胰酶的活性)。 加2-3毫升Trypsin-EDTA,放在37℃培养箱内约5分钟,直到细胞全部脱落。 加6-8毫升培养液,用移液器把细胞吹散。 加适量的细胞到新的培养器皿中。(以1:4到1:8为宜,传代期间培养液更换1-2次)
冻存:95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。
1. Puck TT , et al. Genetics of somatic mammalian cells III. Long-term cultivation of euploid cells from human and animal subjects. J. Exp. Med. 108: 945-956, 1958. PubMed: 13598821
293细胞
  
 
 
 
293细胞比较容易转染,是一个很常用的表达研究外源基因的细胞株。293细胞的一个衍生株:293T/17的转染效率更高,成为广大研究者研究基因功能的一个强大工具。
  293细胞的缺陷是生长过程中贴壁强度比较小。所以在实验过程中容易流失,从而影响实验结果。如果一个实验室新得到的293细胞是邮寄得到的并且细胞在培养瓶中,就需要让细胞沉降几天时间,因为大量细胞会漂浮在培养液里。
来源:人体肾脏 形态:上皮细胞 生长特性:贴壁 注释:该细胞含腺病毒5 DNA 。
培养液: MEM( 含 2 mM L-谷氨酰胺 和 Earle's BSS,1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸钠), 10% 马血清(热灭活)。
传代: 吸去培养液。 用0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次,以去除血清(血清会抑制胰酶的活性)。 加2-3毫升Trypsin-EDTA,放在37℃培养箱内约5分钟,直到细胞全部脱落。 加6-8毫升培养液,用移液器把细胞吹散。 加适量的细胞到新的培养器皿中。(以1:2到1:4为宜,传代期间培养液2-3天更换1次)
冻存:95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。
NIH-3T3细胞
 
 
 
 NIH-3T3细胞在实验室常用来做转染及基因表达的研究。易感病毒有鼠肉瘤病毒和鼠白血病毒。
来源: Mus musculus(小家鼠)胚胎 形态:成纤维细胞样 生长特性:贴壁
注释:为得到适合转染得细胞株,NIH-3T3细胞**少连续克隆过5次。NIH-3T3细胞容易转染DNA,鼠痘病毒阴性。
培养液:DMEM(含4mM L-谷氨酰胺、4.5g/L葡萄糖、1.5g/L碳酸氢钠),10%小牛血清
传代:吸去培养液。(不要让细胞长满培养器皿,长满80%为宜) 用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次,以去除血清(血清会抑制胰酶的活性)。 加2-3毫升Trypsin-EDTA,放在37℃培养箱内约5分钟,直到细胞全部脱落。 加6-8毫升培养液,用移液器把细胞吹散。 加适量的细胞到新的培养器皿中。(以3-5x103/cm2为宜,传代期间培养液每周更换2次)
冻存: 95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。
PC-12细胞
PC-12细胞是一个常用的神经细胞株。
来源: Rattus norvegicus (褐家鼠) 肾上腺嗜铬细胞瘤(一种交感神经系统的肿瘤)
形态:多角型细胞 生长特性:贴壁较松,容易成团
注释:PC-12细胞株来源于一种可移植的鼠嗜铬细胞瘤,该细胞对神经生长因子(NGF)有可逆的神经元显形反应,该细胞不合成肾上腺素。