乳腺癌细胞培养

MCF-7 是一种很好养的人乳腺癌细胞,培养基用DMEM或RPMI1640均可, 10-15%的小牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基,加入0.25%的胰酶1ml,轻轻晃动培养瓶,使胰酶流遍瓶壁,以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶(25ml培养瓶)静置消化2-5min,待细胞缩起变圆,将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可。我一般都不用缓冲液冲洗,而直接用胰酶冲洗一下以去除剩余血清的作用,感觉效果还不错。因为MCF-7消化较快,一般不放到培养箱中消化,以免消化太过。需要注意的是MCF-7生长较快如不及时传代可出现整瓶细胞浮起,一般都来不及抢救。
MDA-MB-231 人乳腺癌细胞
细胞中文名称人乳腺癌细胞
细胞英文名称 MDA-MB-231
物种人
细胞形态特征上皮样
细胞生长特性贴壁生长
细胞特种特性 MDA-MB-231是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。该细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-α受体和WNT7B癌基因
培养基 L15: Leibovitz Medium
血清 10%FBS
细胞传代方法 1:2~1:4传代;每周2~3次
细胞传代情况 C5
细胞冻存条件MDA-MB-231 人乳腺癌细胞基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测阴性
说明
培养基:DMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10%
培养条件:37℃ 5% CO2
消化条件:0.25% (w/v) Trypsin-0.53mM EDTA溶液,消化5-10min
传代的比例:1:2~1:4
换液时间:2~3天换液一次
冻存液比例:85%培养基,10%FBS, 5% (v/v) DMSO
冻存密度:1-2 ×10 6/管,液氮保存
MDA-MB-231 人乳腺癌细胞复苏方法:取出冻存管后,投入37 ℃水浴中,震荡解冻2 min,酒精消毒管壁外侧后,将其转入超净台中,将管内细胞转移**离心管中,加入5 ml 37 ℃预热的培养基,并清洗冻存管一次,将离心管离心(1000 rpm,5 min),弃去上清液,再加入2 ml培养基,转入培养瓶中培养。
 
产品名称:人正常乳腺细胞 Hs 578Bst
规格:70%密度的25cm2培养瓶的细胞一瓶
特点:细胞代数为4-5代左右
包装:内层无菌自封袋;专用防压泡沫盒;外层防压保温气泡袋;说明书
细胞来源:ATCC、sciencell、ICLC
货期:1-2周
运输方式:快递运输
售后:收到细胞后7天,如发现细胞有质量问题(如污染,死亡,快递运输等原因)时,应出具书面质量问题报告并及时传真或E-mail致销售人员,我们将尽快为您解决。
细胞培养常见问题分析
细胞培养
1、冷冻管应如何解冻?
取出冷冻管后,须立即放入37 ℃水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化,并注意水面不可超过冷冻管盖沿,否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时,必须注意安全,预防冷冻管之爆裂。
2、细胞冷冻管解冻培养时,是否应马上去除DMSO?
除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外,绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞),在解冻之后,应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中,待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可,如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
3、可否使用与原先培养条件不同之培养基?
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活。
4、可否使用与原先培养条件不同之血清种类?
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。
5、何谓FBS, FCS, CS, HS ?
FBS (fetal bovine serum)和FCS (fetal calf serum)是相同的意思,两者都是指胎牛血清, FCS 乃错误的使用字眼,请不要再使用。CS (calf serum)则是指小牛血清。HS (horseserum)则是指马血清。
6、培养细胞时应使用5 % 或10% CO2?或根本没有影响?
一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统,而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时,细胞培养时应使用10 % CO2;当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时,则应使用5 % CO2 培养细胞。
7、何时须更换培养基?
视细胞生长密度而定,或遵照细胞株基本数据上之更换时间,按时更换培养基即可。
8、培养基中是否须添加抗生素?
除于特殊筛选系统中外,一般正常培养状态下,培养基中不应添加任何抗生素。
9、附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度?应如何处理?
一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,保存于–20 ℃,避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低,并可减少污染之机会。
10、悬浮性细胞应如何继代处理?
一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可,若培养液太多时,可将培养角瓶口端稍微抬高,直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液**另一新的培养角瓶,加入新鲜培养基稀释**适当浓度,重复前述步骤即可。